产品简介

品牌 CAS 分子式 纯度 分子量 货号 规格 供货周期 主要用途 应用领域

自营品牌	/
/	/
/	AP01L076
100mL	现货
有利于胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。	生物产业

Western/IP细胞裂解液（带抑制剂）是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，对胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用，有利于胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。

详细介绍

Western/IP细胞裂解液（带抑制剂）

产品描述
　　Western及IP裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，对胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用，有利于胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。适用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
订购信息

产品名称	货号	规格	价格
Western/IP细胞裂解液（带抑制剂）	AP01L076	100ml	218

产品组分

产品编号	产品组成	包装规格
AP01L076	Western/IP细胞裂解液	100 mL
	磷酸酶抑制剂	2*1 mL
	PMSF	1 mL
	产品说明书	一份

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保质期一年。
使用方法
1. 对于培养细胞样品
(1) 融解Western及IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的终浓度为1 mM。
(2) 细胞裂解
对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。具体Western/IP裂解液的使用量参照表1。
(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
2. 对于组织样品
(1) 把组织剪切成细小的碎片；
(2) 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的终浓度为1 mM。
(3) 按照每20 mg组织加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液，如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。具体Western/IP裂解液的使用量参照表1。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。   
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项

1. 用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定蛋白浓度。

2. 通常6孔板每孔细胞加入100 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150 μL或200 μL。
3. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
表1： Western/IP细胞裂解液的使用量参考表

样品种类	样品来源	收获细胞数	RIPA用量	可制备样品数
细胞	6孔板	2.5*106	150-250 μL	400-600
	60 mm培养板	5.2*106	300-500 μL	200-300
	90 mm培养板	12.2*106	500-1000 μL	100-200
	25 cm2培养瓶	5*106	300-500 μL	200-300
	75 cm2培养瓶	2*107	1000-2000 μL	50-100
组织	20 mg组织块		150-250 μL	400-600

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